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關(guān)于豬藍(lán)耳病檢測(cè)你真的了解嗎?
更新時(shí)間:2019-10-24 點(diǎn)擊量:3283
       豬藍(lán)耳病檢測(cè)的主要目的是測(cè)定豬血清中豬藍(lán)耳病毒抗體,可用于評(píng)估感染豬的血清學(xué)診斷以及豬藍(lán)耳病毒疫苗免疫狀況分析。
  一、豬藍(lán)耳病檢測(cè)的檢驗(yàn)原理:
  本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)原理,由包被有高純度的豬藍(lán)耳病毒抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的PRRSV-Ab結(jié)合,再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PRRSV-Ab+酶標(biāo)抗豬IgG抗體”復(fù)合物,加入顯色劑,通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與PRRSV-Ab的量成正比,當(dāng)樣本反應(yīng)顯色后,經(jīng)酶標(biāo)儀檢測(cè)所得結(jié)果超過設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽性,即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。
  二、豬藍(lán)耳病檢測(cè)的樣本要求:
  1.本試劑檢測(cè)的樣本為豬血清,樣本應(yīng)無菌采集,2℃~8℃貯存應(yīng)不超過一周,長(zhǎng)期應(yīng)在-20℃以下保存。
  2.避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長(zhǎng)菌及含疊氮鈉血清樣本。
  三、豬藍(lán)耳病檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備:
  1.試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前,先取出置室溫30min,可以獲得較佳結(jié)果。.
  2.樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋,稀釋的樣本混合均勻能取得較好結(jié)果。
  3.配制洗滌液:將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍(例:將50ml洗滌液加入950ml去離子水中)。若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶,屬正?,F(xiàn)象,放置37℃至溶解后即可。
  四、豬藍(lán)耳病檢測(cè)的檢驗(yàn)方法:
  1.加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條,檢測(cè)時(shí),設(shè)陰、陽性對(duì)照各2孔,分別加入不用稀釋的陰、陽性對(duì)照血清100μl于相應(yīng)孔中(可不設(shè)空白對(duì)照)。其余為樣本孔,每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本(可做單孔也可雙孔檢驗(yàn))。
  2.溫育:加樣后,蓋上蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。
  3.洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿反應(yīng)板孔,靜置10s左右,直接甩出,洗滌3次,洗滌后拍干板內(nèi)液體。
  4.加酶:每孔加酶標(biāo)記物100μl。
  5.溫育:加好酶標(biāo)記物后蓋上蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。
  6.洗板:同步驟3。
  7.顯色:每孔加顯色劑100μl,振蕩混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘。
  8.終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻,終止后即讀數(shù)。
  9.讀數(shù):以450nm/630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè),讀取各孔吸光度值(OD值)。
  五、豬藍(lán)耳病檢測(cè)的結(jié)果判定:
  在酶標(biāo)儀上測(cè)各孔的OD值。檢測(cè)結(jié)果有效的條件是陽性對(duì)照孔的平均OD值≥0.6,陰性對(duì)照孔的平均OD值必須<0.15;樣品中抗體存在與否,或樣本中抗體的相對(duì)水平的高低由S/P值決定,S/P值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:
  S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/(PCx(—)-NCx(—)),其中NCx(—)表示陰性對(duì)照孔平均OD450/630值,PCx(—)表示陽性對(duì)照孔平均OD450/630值;
  當(dāng)樣本的S/P≥0.2時(shí)判為陽性;樣品S/P值<0.2時(shí)判為陰性;
  若進(jìn)行大量樣本檢測(cè)時(shí),可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行分析數(shù)據(jù)結(jié)果。

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