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植物淀粉含量試劑盒說(shuō)明書
更新時(shí)間:2019-12-09 點(diǎn)擊量:1874

植物淀粉含量試劑盒說(shuō)明書

可見分光光度法

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

淀粉是植物中糖的主要儲(chǔ)存形式,其含量測(cè)定對(duì)于評(píng)價(jià)食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。

測(cè)定原理:

利用 80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開,進(jìn)一步采用酸水解法分解淀粉為葡萄糖,采用蒽酮比色法測(cè)定葡萄糖含量,即可計(jì)算淀粉含量。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽、冰、濃硫酸(不允許快遞)、

研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;

試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;

淀粉提?。?/span>

1、 稱取0.1~0.2g 樣本(建議稱取約0.1g樣本)于研缽中研碎,加入1mL試劑一,充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,80℃水浴提取30min,3000g,25℃離心5min,棄上清,留沉淀。

2、 沉淀中加入0.5mL蒸餾水,放入95℃水浴中糊化15min(蓋緊,以防止水分散失)。

3、 冷卻后,加入0.35mL 試劑二,25℃提取15min,振蕩3-5次。

4、 加入0.85mL 蒸餾水,混勻,3000g,25℃離心10min,取上清液待測(cè)。

測(cè)定操作表 (在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑) :

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至620nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 調(diào)節(jié)水浴鍋至 95 度。

3、 工作液的配制:臨用前在試劑三中加入7.5mL蒸餾水后,緩慢加入42.5mL濃硫酸,不斷攪拌,充分溶解,待用;用不完的試劑 4℃保存一周;

4、 樣本測(cè)定:取0.2mL樣本和1mL工作液至EP管中,95度水浴10 min(蓋緊,防止水分散

失),自然冷卻至室溫,在620 nm 波長(zhǎng)下記錄測(cè)定吸光度值A(chǔ)。

 

 

 

 

 

淀粉含量計(jì)算:

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y=5.872x-0.0295;

x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值。

1、按照蛋白濃度計(jì)算

淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr

2、按樣本鮮重計(jì)算

淀粉含量(mg/g 鮮重)= [(A+0.0295)×V1]÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W

V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.2mL;V2:加入提取液體積,1.7 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)

濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g

注意 :由于工作液具有強(qiáng)腐蝕性,請(qǐng)謹(jǐn)慎操作。

若吸光值大于1,請(qǐng)將樣本用提取液稀釋后再測(cè)定,計(jì)算公式中乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

提取液的配置:0.35mL 試劑二+1.35mL 水。用多少按照此比例配多少。

低檢測(cè)限為10μg/g  鮮重或100ng/mgprot 。

A549-DDP細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明書

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