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免疫組化ABC法操作步驟
更新時間:2021-04-22 點擊量:2448

免疫組化ABC法

 

一)、儀器設備
   1)18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或醫(yī)用微波爐;
    2)水浴鍋

(二)、試劑 
    1)PBS緩沖液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。
    2)0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液(CB,pH6.0,1000ml):檸檬酸三鈉 3g,檸檬酸 0.4g。
    3)0.5mol/L EDTA緩沖液(pH8.0):700ml水中溶解186.1gEDTA·2H2O,用10 mmol/L NaOH調至pH8.0,加水至1000ml。
    4)1mol/L的TBS緩沖液(pH8.0):在800ml水中溶解121gTris堿,用1N的HCl調至pH8.0,加水至1000ml。
    5)酶消化液: a、0.1%胰蛋白酶液:用0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b、0.4%胃蛋白酶液:用0.1N的HCl配制。
    6)3%甲醇-H2O2溶液:用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。
    7)封裱劑:
    a、甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩沖液(pH9.0~9.5)等量混合;
    b、油和TBS(或PBS)配制。 
    8)TBS/PBS pH9.0~9.5,適用于熒光顯微鏡標本;pH7.0~7.4適合于光學顯微鏡標本。

)、   
    SABC法
    1)脫蠟、水化。
    2)PBS洗兩次各5分鐘。
    3)用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2,室溫封閉5~10分鐘,蒸餾水洗3次。
    4)抗原修復。
    5)PBS洗5分鐘。
    6)滴加正常山羊血清封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體。
    7)滴加抗小鼠抗(合適的濃度,室溫1小時或者4℃過夜或者37℃1小時 

  4℃過夜后在37℃復溫45分鐘)。
    8)PBS洗三次每次2分鐘。
    9)滴加生物素化二抗,20℃~37℃20分鐘。
    10)PBC洗3次每次2分鐘。
    11)滴加試劑SABC,20℃~37℃20分鐘。
    12)PBS洗4次每次5分鐘。
    13)DAB顯色:DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色(鏡下掌握顯色程度)。
    14)蒸餾水洗。蘇木素復染2分鐘、鹽酸酒精分化。
    15)脫水、透明、封片、鏡檢。

 

實驗代做服務:

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

HE染色

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化IHC染色

熒光定量PCR

動物模型服務

流式細胞檢測

免疫熒光染色

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

石蠟/冰凍切片

透射電鏡服務

掃描電鏡實驗

蛋白雙向(2-D)

動物實驗

免疫共沉淀

原位雜交(FIsh

蛋白質純化

分子克隆和質粒載體構建服務

組蛋白甲基化磷酸化乙?;?/a>

 

蛋白雙向2D-WB

 

藥理毒理動物實驗

 

番紅O固綠染色

明膠酶譜MMP

酶活性檢測

動物造模/模型實驗服務

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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