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ELISA檢測(cè)e抗原靈敏度更高
更新時(shí)間:2011-09-09 點(diǎn)擊量:1367

ELISA檢測(cè)e抗原靈敏度更高

 

E抗原是從乙肝表面抗原(HBsAg)陽(yáng)性血清中發(fā)現(xiàn)的一種新抗原,他可能與乙型肝炎的傳染性有密切關(guān)系。李羽等報(bào)道用ELISA檢測(cè)e抗原的靈敏度比瓊脂免疫擴(kuò)散法高150300倍。試驗(yàn)程序:

1.病人免疫球蛋白IgGe抗體)的提?。河蔑柡土蛩徜@沉淀法處理上述抗體陽(yáng)性人血清所得粗提液過(guò)柱(DEAE-Cellulose)收集IgG陽(yáng)性部分,再穿流正常人血清柱。得IgGe抗體),濃縮為5ng/ml貯藏放于冰箱中。

2.酶標(biāo)記IgGe抗體)的制備:用戊二醛二步法,將10mg  HRP交聯(lián)5 mg  IgGe抗體),分裝于小瓶,在低溫(-20°C)下保存。

3.ELISA對(duì)e抗原的檢測(cè):

a. IgGe抗體)包被聚苯乙烯微量反應(yīng)板,在4°C過(guò)夜(IgG濃度為25r/ml)。

b.洗滌3-5次。

c.加待檢病員血清(1:10稀釋,每份標(biāo)本加兩孔,每孔0.1ml,37°c孵育2h.

e.洗滌3-5次。

f.加酶標(biāo)記IgGe抗體),37°C孵育2h(酶標(biāo)記IgG稀釋度為1:640)。

g.洗滌3-5次。

h.加底物與供氫體(H2O2OPD,置于暗處反應(yīng)30min.

i.2mol/L硫酸終止反應(yīng)。

j.每板均設(shè)陽(yáng)性與陰性對(duì)照,根據(jù)不同的顯色反應(yīng)予以判斷。

k.經(jīng)過(guò)上訴方法檢測(cè)初步確定為陽(yáng)性的標(biāo)本,取兩份,一份加足量的e抗體血清,另一份加正常人血清,在37°C孵育1h,然后再按上述方法測(cè)定e抗原。加e抗原體血清者,在顯色反應(yīng)受到控制(與正常血清對(duì)比)時(shí)才可判斷為e抗原陽(yáng)性。

 

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