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土壤脫氫酶 (Soil dehydrogenase, sDHA) 試劑盒說明書
更新時間:2023-10-11 點擊量:774

                                                                                                    規(guī)格:100 管/48 樣

土壤脫氫酶 (Soil dehydrogenase, sDHA) 試劑盒說明書

微量法

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:

土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對 有機物的降解活性,可以作為土壤微生物的降解性能指標。

測定原理:

氫受體 2, 3, 5 -  氯化三苯基四氮唑 (2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC) 在細胞呼 吸過程中接受氫以后,被還原為三苯基甲鐟 (Triphenyl Formazone, TF),TF  呈現(xiàn)紅色,在波 長 485nm 處有最大吸收峰,采用分光光度法于 485nm測定其吸光值,即得土壤脫氫酶活性。

自備實驗儀器及用品:

篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比 色皿/96  孔板、冰、蒸餾水、丙酮 (不允許快遞,請用戶自備)。

試劑的組成和配制:

試劑一:粉劑×1  瓶,使用前加 5mL  水溶解,4℃避光保存 (盡量現(xiàn)配現(xiàn)用)。 試劑二:液體 20mL×1  瓶,4℃保存。

試劑三:丙酮, 自備。

樣品處理:

1.  土壤樣品:準確稱取過 40  目篩的新鮮土壤樣品約 0. 1g(以保證 TTC 與土壤顆粒充分接觸)。

2.  污泥樣品:污泥用蒸餾水洗滌,10000g ,25℃ ,離心 10min ,棄上清,反復 3-4 次。 測定步驟和操作表:

1 、分光光度計/酶標儀預熱 0min ,調(diào)節(jié)波長至 485nm。

2 、操作表

對照管測定管

樣品 (g)0.050.05

試劑一 (mL)0.1

試劑二 (mL)0.20.1

置于 EP  管中,充分混勻,37℃ ,暗培養(yǎng) 6h ,取出后立即冰浴 5min

試劑三 (mL)0.10.1

反復震蕩數(shù)次,37℃保溫 10min ,10000g ,4℃ ,離心 5min ,取 200μL  上清于微量石英比色 皿/96  孔板,對照管調(diào)零,測定 A 485  。

脫氫酶活力計算:

酶活單位定義:

在 37℃時,每克樣品每小時使反應體系 OD  值每增加 0.01 為一個酶活單位。 計算公式:脫氫酶活性 (U/g) =A 485 ÷0.01÷T÷W= 16.67×A 485 ÷W

T :培養(yǎng)時間,h;W:樣品質(zhì)量,g



注意事項:

1.  配制好的試劑一避光保存于 4℃ ,最好在一周內(nèi)使用,若出現(xiàn)紅色,則不能使用。

2.  試劑三易揮發(fā),有毒,為了您的健康,請穿實驗服,戴口罩,戴乳膠手套操作。

3.  反應完成后立即冰浴以終止反應,并去除干凈殘留的反應液。

4.  如果測定出來的吸光值較大,減少樣品用量再進行測定。

5.  試劑盒 2-8℃保存。

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