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ZR-75-30 人乳腺癌細(xì)胞傳代/復(fù)蘇操作
更新時間:2024-03-29 點擊量:366

ZR-75-30 人乳腺癌細(xì)胞

,ZR7530

貨號:YJ-h395(STR鑒定)

價格: 1800.0

規(guī)格: 1*106 

細(xì)胞介紹

ZR-75-30源自一位47歲女性黑人更年期侵入性導(dǎo)管癌患者的腹水。 細(xì)胞定性為人,非-HeLa,惡性乳房上皮癌起始。

細(xì)胞特性

1) 來源:女 乳腺;乳房;上皮;導(dǎo)管癌腹水轉(zhuǎn)移灶  

2) 形態(tài): 上皮細(xì)胞樣,貼壁細(xì)胞

3) 含量:>1x106  細(xì)胞數(shù)

4) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

運輸和保存

干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1)收到細(xì)胞后先不開瓶蓋 ,請及時核對培養(yǎng)瓶上標(biāo)注的細(xì)胞名稱是否與訂購的 細(xì)胞名稱一致之后用75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約1-2h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。之后請盡 快傳代培養(yǎng)。如果當(dāng)天無法操作 ,請常溫 ( 約 25。C) 放置 ,第二天需及時操作 。

3)收到細(xì)胞后若發(fā)現(xiàn)存在細(xì)胞脫落現(xiàn)象:請將培養(yǎng)瓶中所有培養(yǎng)液收集至離心 管,離心 ( lOOOrpm , 5min ) ,棄上清,加 lml 的 0.25%胰酶于離心管中 ,輕輕吹 打,重懸,作用 10 分鐘后,加 3-6mL 完全培養(yǎng)基中止反應(yīng) 。再離心,去上清, 加 1-3mL 完全培養(yǎng)基重懸 。仍然貼壁的細(xì)胞,按照以上描述的常規(guī)方法加入胰酶消化。最后將消化好的脫落細(xì)胞和貼壁細(xì)胞混合 ,按比例接種到新的 T25 培 養(yǎng)瓶中即可 。

4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 。

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1)準(zhǔn)備1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 (推薦:YJ-0002),優(yōu)質(zhì)胎牛血清20 %, P/S ,1%

備注:ZR-75-30 細(xì)胞長的比較慢,約 10-14 天才能長滿,可 2 天換一次液。 該細(xì)胞對血清質(zhì)量較為敏感 ,我?guī)旖ㄗh您使用進口的優(yōu)質(zhì)胎牛血清進行培養(yǎng)或選擇訂購我?guī)旒?xì)胞專用培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。

2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3)凍存細(xì)胞:凍存細(xì)胞時,用FBS重懸細(xì)胞,然后加入一定量的DMSO,輕輕混合均勻后移入到凍存管中,DMSO終濃度為10%。

二.細(xì)胞處理:

1) 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

ZR-75-30 人乳腺癌細(xì)胞.png


下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項

1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。

4.所有動物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十余年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

實驗技術(shù)服務(wù):


滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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