一个人在线观看视频的免费,国产精品VIDEOSSEX久久,少妇精品揄拍高潮少妇,欧美AV在线观看

網(wǎng)站首頁技術(shù)中心 > HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+GFP傳代/復(fù)蘇技巧
產(chǎn)品目錄
HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+GFP傳代/復(fù)蘇技巧
更新時間:2024-08-13 點擊量:251

HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+GFP

Immortalization of human umbilical vein endothelial cells ,HUVEC GFP

貨號:YJ-0022a(免疫熒光鑒定)

價格: 3200.0

規(guī)格: 1*10 6

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞來源于人靜脈內(nèi)皮,可在半固體培養(yǎng)基中形成克隆,在免疫抑制小鼠中不能形成腫瘤。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。

細(xì)胞特性

1 來源:人臍帶組織

2 形態(tài):內(nèi)皮細(xì)胞樣 貼壁生長

3 含量:>1x106  細(xì)胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

細(xì)胞篩選

該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其GFP熒光強(qiáng)度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。

建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

準(zhǔn)備內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)體系(推薦:PriMed-YJ-002      

內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基                     93%

胎牛血清(FBS                                 5%

內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)添加劑                             1%

青霉素/鏈霉素,P/S                               1%

1 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

2 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細(xì)胞處理:

1 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。

HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+GFP傳代/復(fù)蘇技巧


下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十余年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

實驗技術(shù)服務(wù):



滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

人妻忍着娇喘被中进中出视频| 亚洲第一第二第三第四第五| 久久精品国产亚洲欧美 | 色综合久久一区二区三区| 久久久久亚洲AV成人网人人网站| 国产成人无码一区二区三区| 精品国产乱码久久久人妻| 欧美裸体XXXX极品少妇| 精品一区二区三区四区五区六区| 国产精品久久国产精品99| 歪歪爽蜜臀AV久久精品人人槡| 亚洲熟女乱综合一区二区| 中文字幕乱码人妻一区二区三区| 久久精品亚洲av无码乱码三区| 国产精品久久久久精品日日| 亚洲狠狠婷婷综合久久久久图片| 欧美最猛黑人XXXX黑人猛交| 亚洲熟妇无码av在线播放| 野花免费高清完整在线观看| 日韩DVD碟片| 观看欧美大片毛大片| 国产精品中文久久久久久久| 亚洲AV无码国产精品久久不卡| 三年片在线观看免费观看大全| 精品无码国产av一区二区| 亚洲AV无码一区二区三区DV| 久久综合狠狠综合久久综合88| 好男人资源在线看免费的| 99久久无码一区人妻| 国产婷婷色一区二区三区| AV一区二区三区人妻少妇| 国产精品亚洲AV人片| 热RE99久久精品国产66热| 无码国产精品一区二区免费I6| 一道久久爱综合久久爱| 99精品国产兔费观看久久| 国产又爽又粗又猛的视频| 人妻少妇精品无码专区APP| 免费国产裸体美女视频全黄| 亚洲av色情成人永久网站小说| 免费看美女被靠到爽的视频|