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磁珠法PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒說(shuō)明書
更新時(shí)間:2015-05-27 點(diǎn)擊量:3188

   

磁珠法PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒說(shuō)明書

 

 

Magbind PCR Purification Kit

目錄號(hào):YJ2516

運(yùn)輸條件:室溫(15-25℃)。

保存條件:MBPure 2-8℃保存,其他組分室溫(15-25℃)保存。

組分說(shuō)明

 

                       Size          5 ml       60 ml

                       MBPure        5 ml       60 ml

                       Buffer PW    12 ml     3×48 ml

                       Buffer EB     6 ml       60 ml

 

 

              本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途

 

               上海研謹(jǐn)生物中國(guó)生物試劑生產(chǎn)商  

 

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

  本試劑盒提供了一種簡(jiǎn)單、快速、的核酸純化方法。MBPure與樣品按一定比

例混合后,磁珠選擇性的將核酸吸附。漂洗后,洗脫得到的DNA純度高,A260/A280                                   的比值在1.7-1.9之間,A260/A230的比值通常在2.0以上。經(jīng)該試劑盒純化得到的  DNA適用于測(cè)序,克隆等下游實(shí)驗(yàn)。

試劑盒說(shuō)明

 

      Sample type         Typical yield     Sample type        Typical yield

      5000 bp segment      Up to 90%      1000 bp segment       Up to 90%

      500 bp segment       Up to 80%       200 bp segment       Up to 80%

 

純化回收得率的計(jì)算

 

   我們建議通過(guò)瓊脂糖電泳純化前后的樣品進(jìn)行回收得率的計(jì)算。我們不建議通過(guò)

260 nm處的光吸收值來(lái)計(jì)算回收得率。因?yàn)槿芤褐袉捂?、雙鏈DNA和dNTP以及一些純

化前的某些雜質(zhì)在260 nm處都有光吸收,這樣在計(jì)算回收前樣品中 DNA濃度時(shí)會(huì)得到

一個(gè)假的、虛高的DNA濃度值。

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)

1.嚴(yán)禁冰凍、離心。冰凍、離心可能會(huì)對(duì)磁珠造成不可逆的損害。

2.磁珠長(zhǎng)期放置后會(huì)聚集成團(tuán),從而使磁珠表面積減小,降低樣品回收得率,使用前

   一定要渦旋振蕩*混勻磁珠(這一過(guò)程通常需要渦旋振蕩20秒)。

3.本試劑盒不適用于純化回收小于100 bp的DNA片段,如果要回收小于100 bp的DNA

   片段,可將MBPure的用量增加到樣品體積的4倍。

自備儀器

1.恒溫混勻儀——建議使用Eppendorf設(shè)計(jì)生產(chǎn)的Thermomixer。

2.磁力架——建議使用DynaMagTM-2(Cat. No. 12321D)。

 

操作步驟(手動(dòng))

 

   1.渦旋振蕩MBPure 20秒,使其*混勻?yàn)榫蝗芤骸?/SPAN>

   2.向1.5 ml的離心管中加入待純化的PCR產(chǎn)物或其他DNA樣本,然后加入2倍樣品體積的MBPure。渦旋振蕩混勻后,室溫下在1400 rpm的Thermomixer上振蕩5分鐘。

 

注意:如無(wú)Thermomixer,可將離心管連續(xù)顛倒混勻10分鐘。

   3.將上一步的離心管放于磁力架上,直至磁珠*吸附(約需1分鐘)。

   4.保持離心管固定于磁力架上,棄去溶液,期間避免接觸磁珠。

   5.向上一步的離心管中加入500 μl Buffer PW后,將離心管從磁力架上取下,渦旋振蕩

      10秒鐘后將離心管重新放回磁力架。靜置1分鐘,待磁珠*吸附于離心管側(cè)壁后*棄去漂洗液。

   6.重復(fù)步驟5。

   7.保持離心管固定于磁力架上靜置放置10分鐘,使乙醇*揮發(fā)干凈。

      注意:如果磁珠干燥過(guò)度會(huì)極大的降低DNA的回收得率。

   8.將離心管從磁力架上取下,加入20-100 μl Buffer EB,渦旋振蕩將磁珠重懸于洗脫液

      中后將離心管放于65℃、1400 rpm的Thermomixer上振蕩洗脫5分鐘。

注意:如無(wú)Thermomixer,可將離心管放于65℃水浴鍋或金屬浴中孵育。孵育期間每隔2分鐘渦旋震蕩5秒鐘。

   9.將離心管放于磁力架上直至磁珠*吸附(約需1分鐘)。

   10.將洗脫液轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的1.5 ml離心管中。此時(shí),可棄去磁珠。

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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