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HiFiScript cDNA*鏈合成試劑盒說明書
更新時間:2015-06-08 點擊量:3244

HiFiScript cDNA*鏈合成試劑盒說明書

  

HiFiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit

HiFiScript cDNA*鏈合成試劑盒

 

目錄號:YJ2569

保存條件:-20℃保存。

組分說明

 

              Size                           25            100

              HiFiScript,200 U/μl           25 μl         100 μl

              5×RT Buffer                   120 μl        500 μl

              Primer Mix                    60 μl         240 μl

              dNTP Mix,2.5 mM Each          120 μl        500 μl

              DTT,0.1 M                     60 μl         240 μl

              RNase-Free Water               1 ml          1 ml

 

 

                本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

 

 

產(chǎn)品簡介

 

  本產(chǎn)品是專為兩步法RT-PCR*步實驗配制的cDNA*鏈合成試劑盒。該試劑

盒中使用的HiFiScript逆轉(zhuǎn)錄酶是M-MLV由來的新型逆轉(zhuǎn)錄酶,新穎突變位點大幅

提升酶的轉(zhuǎn)錄活性,  cDNA*鏈合成的效率和產(chǎn)量更高,可利用    pg級的總 RNA或

mRNA合成cDNA*鏈。點突變消除RNase  H活性,酶的延伸性能提高,有效改善逆

轉(zhuǎn)錄酶與RNA模板的親和力,可獲得長至12  kb的cDNA。精心優(yōu)化的RT Buffer使逆轉(zhuǎn)

錄酶應用范圍更廣,對后續(xù)的 PCR以及定量PCR實驗兼容性高。該試劑盒配備所有逆

轉(zhuǎn)錄試劑,使用簡單方便。適用于*鏈cDNA的合成和后續(xù)的RT-PCR、RT-qPCR,

以及全長cDNA文庫的構建等。

 

產(chǎn)品特點

 

1.的逆轉(zhuǎn)錄效率:新穎突變位點大幅提升酶活性能,獲得更高產(chǎn)量的cDNA。

2.良好的延伸能力:點突變消除RNase H活性,改善逆轉(zhuǎn)錄酶與RNA模板的親和力,

   可獲得長至12 kb的cDNA。

3.靈敏度高:可利用pg級的總RNA或mRNA模板合成cDNA*鏈。

4.使用方便:逆轉(zhuǎn)錄試劑盒中已配備所有逆轉(zhuǎn)錄試劑,僅需準備模板即可輕松完成逆

   轉(zhuǎn)錄。

 

注意事項

 

1.在操作過程中應避免RNase污染,防止RNA降解或?qū)嶒炛械慕徊嫖廴?,建議在專門

   的區(qū)域進行RNA操作,使用專門的儀器和耗材,操作人員帶口罩和一次性手套并經(jīng)

   常更換手套。

2.實驗盡量使用一次性塑料器皿,若使用玻璃器皿,應使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙

   酯)水溶液在37℃處理12小時,并在120℃下高壓滅菌30分鐘后使用,或者將玻璃

   器皿在180℃下干熱滅菌60分鐘后使用。實驗中用到的無菌水應使用 0.1%的DEPC

   處理后進行高壓滅菌。

3.本試劑盒中的所有試劑使用前請上下顛倒輕輕混勻,盡量避免起泡,并經(jīng)短暫離心

   后使用。所涉及的酶類使用后應盡快放回-20℃,避免反復凍融。

4.若起始RNA的量小于50  ng,建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提

   供,如需要可單獨向本公司訂購,貨號:YJ0596。

 

使用方法

 

注意:1 ng-5 μg總RNA可建立20 μl反應體系,如果總RNA量大于5 μg,請按比例擴大反應體系。

 i逆轉(zhuǎn)錄操作步驟:

1.將RNA模板、Primer  Mix、dNTP  Mix、DTT、RT  Buffer、HiFiScript和RNase-Free  

   Water溶解并置于冰上備用。

2.根據(jù)以下表格配制反應體系,總體積為20 μl。

 

試劑                            20 μl反應體系             終濃度

dNTP Mix,2.5 mM Each               4  μl         500 μM Each

Primer Mix                         2  μl

RNA Template                       X  μl          50 pg-5μg

5×RT Buffer                        4  μl              1×

DTT,0.1 M                          2  μl            10 mM

HiFiScript,200 U/μl                1  μl

RNase-Free Water               up to 20  μl

 

    注意:1)若起始RNA的量小于50 ng,則建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提供,如需要可單獨向本公司訂購,貨號:YJ0596。

    2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random Primer配制而成。

3.渦旋震蕩混勻,短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

4.42℃孵育30-50分鐘,85℃孵育5分鐘。反應結(jié)束后,短暫離心,置于冰上冷卻。

5.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于PCR反應和熒光定量PCR反應,或置于-20℃長期保存。

ii  若逆轉(zhuǎn)錄效率低,或RNA模板二級結(jié)構復雜、GC含量高時,建議采用以下步驟:

1.將RNA模板、Primer  Mix、dNTP  Mix、DTT、RT  Buffer、HiFiScript和RNase-Free  

   Water溶解并置于冰上備用。

2.根據(jù)以下表格配制反應體系,總體積為13 μl。

 

試劑                            20 μl反應體系             終濃度

dNTP Mix,2.5 mM Each               4  μl         500 μM Each

Primer Mix                         2  μl

RNA Template                       X  μl          50 pg-5μg

RNase-Free Water               up to 13  μl

 

3.70℃孵育10分鐘,迅速冰浴2分鐘。

4.短暫離心,使管壁上的溶液收集到管底。

5.繼續(xù)向以上反應液中加入以下試劑:

 

試劑               20 μl反應體系          終濃度

5×RT Buffer           4 μl            1×

DTT,0.1 M             2 μl          10 mM

 

        注意:1)若起始RNA的量小于50 ng,則建議加入RNA酶抑制劑(RNasin)。本試劑盒并未提

        供,如需要可單獨向本公司訂購,貨號:YJ0596。

        2)Primer Mix由Oligo(dT)和Random primer配制而成。

 

     6.輕輕吹打混勻,42℃孵育2分鐘。

     7.加入1 μl HiFiScript(200 U/μl),輕輕吸打混勻。42℃孵育50分鐘。

     8.85℃孵育5分鐘。反應結(jié)束后,短暫離心,置于冰上冷卻。

     9.逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可直接用于 PCR反應和熒光定量 PCR反應,加入量應小于 PCR反應體系的1/10,或置于-20℃長期保存。

 

     相關產(chǎn)品信息

 

       目錄號  產(chǎn)品名稱                                        產(chǎn)品特點

YJ0580   TRIzon總RNA提取試劑                 適用范圍廣的RNA提取試劑

YJ0581  超純RNA提取試劑盒    兼具有適用范圍廣和純度高特點的RNA提取試劑

YJ0597  超純RNA提取試劑盒(含DnaseI)

                                靈敏度高,可識別pg級別的模板。與RNA親和力強,

YJ0741   SuperRT cDNA*鏈合成試劑盒

                                     能夠通讀GC含量高,二級結(jié)構復雜的RNA模板。

YJ0744   HiFi-MMLV cDNA*鏈合成試劑盒  獲得cDNA產(chǎn)物

                  

YJ2381  SuperQuickRT  cDNA*鏈合成試劑盒(For Real-time PCR) 

                                   逆轉(zhuǎn)錄(針對于熒光定量PCR)僅需15分鐘,即可完成熒光定量PCR所需的cDNA 

SuperQuickRT MasterMix           即用型逆轉(zhuǎn)錄mix,只需加入RNA和水即可反應。僅

YJ2391   (for Real-Time PCR)           需15分鐘,即可完成熒光定量PCR所需的cDNA 

YJ0688   Es Taq DNA Polymerase 

                                            兼具高擴增效率和高保真性的PCR產(chǎn)品

YJ0690   Es Taq MasterMix 

YJ0957   UltraSYBR Mixture                      熒光定量PCR—SYBR Green法

YJ0956   UltraSYBR Mixture(With ROX)            特異性強、Ct值低、定量更準確

 

滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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